第五章色层层析法思维导图

U554171733

2024-01-15

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吸附色谱法

无需再生处理

层析滤纸

色层层析法介绍

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思维导图大纲

概述

色层分析法简称层析法，也称色谱法，是分离复杂混合物中各组分的一种物理化学方法。

利用物质的物理，化学性质的差异，使各组分以不同程度分布在两项中，当流动项流过含有样品的固定项时，各组分以不同的速度移动，从而达到相互分离。

构成层析法的条件

混合物中各组分的物理化学性质有差异

具有两项，一项是固定项，一项是流动项

多次冲洗或展开

层析法分类

按两项状态分类

气相色谱

气固色谱

气液色谱

液相色谱

液固色谱

液液色谱

按固定相的形状不同

柱层析

薄层层析

纸上层析

按分离过程的物理化学性质分类

吸附层析

分配层析

离子交换层析

凝胶过滤

亲和层析

按洗脱方式分类

洗脱法

迎头法

迎头法洗脱在分离多组分混合物时，除第一组分外，其余均非纯态，因此仅适用于从含有微量杂质的混合物中分离出一个高纯组分，它不是一个理想的分离方法，仅用于混合物的分析研究。

置换法

柱层析

组分分离在柱内进行

按分离机理不同，可以分为四类

吸附色谱法

依据目标物杂质与吸附剂之间的吸附力不同而分离

吸附色谱三要素

吸附剂

吸附剂要具有合适的吸附力，较大的比表面积

吸附剂颗粒均匀

西吸附剂与吸附物质的吸附解析应是可逆的

吸附剂不含有杂质

洗脱剂

在洗脱法色谱操作中，流动向携带待测组分在色谱柱内向前移动，并流出色谱柱的过程，称为洗脱所用流动向，称为洗脱剂

首先考虑样品在溶剂中的溶解度

溶剂沸点要适宜

溶剂纯度要高无杂质

试样

分配色谱法

分配系数不同而分离

原理是利用被分离的各个组分，在互不相容的固定项和流动项中溶解度不同，在试样组分随流动项移动通过色谱柱的过程中，组分在两项中不断建立，打破和重新建立分配平衡

离子交换色谱法

化学亲和力不同而分离

是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的方法，即溶液中的离子同功能基团交换反应的过程是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的方法，即溶液中的离子同功能基团交换反应的过程

适用于分离纯化蛋白质多肽核酸以及大部分发酵产物

阳离子交换树脂

强酸性阳离子交换树脂

弱酸性阳离子交换树脂

羧酸型和分型树脂

阴离子交换树脂

强碱性阴离子交换树脂

能在水中解离出氢氧根而生成强碱性

弱碱性阴离子交换树脂

凝胶色谱法

分子大小或形状不同而分离

凝胶层析

当让品种也通当样品溶液通过凝胶柱时，相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔，而只能沿着凝胶颗粒的间隙，随着容积流动，因此流程较短，向前移动速度快而首先流出层析，反之相对分子质量较小的物质则最后流出层西

分子越大的组分越先流出，分子越小的组分越后流出，这样样品经过凝胶层析后，各个组分按分子从大到小的顺序依次流出，从而达到分离的目的

凝胶层析应用范围

适用于各种生化物质，如肽类，激素，蛋白质，多糖核酸的分离纯化

特点

操作条件比较温和，温度和ph适应范围广

洗脱条件温和

工作范围比较宽

无需再生处理

凝胶类型

葡萄聚糖凝胶

聚丙烯酰胺凝胶

琼脂糖类凝胶

等等

凝胶层析的应用

脱盐和浓缩

分离纯化

蛋白质和酶的分离纯化，肽和激素的分离，抗体纯化，多聚体的分离与纯化

相对分子质量的测定

纸上层析

原理

纸上层细的操作是在一张特制的绿纸上，一端滴上要分离的样品溶液放在密闭容器中，使溶剂从有样品的一端流向另一端，从而使样品中的混合物得到分离，再通过显色使分离后的各物质在滤纸的各个位置上显现出了

操作方法及操作条件的选择

层析滤纸

对滤纸的要求

物理性状均匀

具有一定的机械强度

纤维松紧程度适合纤维松紧程度适合

具有一定纯度

滤纸上不应含有溶于水及有机溶剂的物质

溶剂系统的组成

操作方法

点样

平衡

展开

按溶剂在滤纸上流动方向的不同，可以分为

上升法

下降法

水平法

显色

紫外线显色法

显色剂显示法

喷雾法

涂刷法

薄层层析

是江西附是将吸附剂或者支持剂均匀铺在平面板上，形成薄层，把样品点到薄层上，然后用合适的溶剂展开，从而达到分离鉴定和定量的目的

应用范围

有机物和无机物离子的分离和鉴定有机物和无机物离子的分离和鉴定

与指层析相比，薄层层析具有优点

展开时间短

层析后得到的斑点小而清晰

能够使用多种显色剂

点样量少

分类

吸附薄层层析

主要用于脂溶性物质的分离

分配薄层层析

适用于水溶性物质的分离

离子交换薄层层析

其他

操操作条件的选择

吸附剂

硅胶，氧化铝，聚酰胺

支持剂

常用支持剂是纤维素及硅藻土

展开剂

根据溶剂的极性，被测物质的极性以及吸附剂的活力三方面考虑

操作方法

薄层板的制作

硬板

软板

点样

直接点样板

滤纸移动样法

展开

显色

紫外显示法

显色剂显示法

定性与定量分析

影响薄层层析的因素

吸附剂的粒度

吸附剂的活性

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