Ⅰ定义:从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适当的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。 Ⅱ原理:细胞增殖(有丝分裂)。 Ⅲ培养对象:胚胎或幼龄动物的细胞。 Ⅳ目的:获得细胞或细胞产物。
培养条件:①营养条件:糖类(通常选择葡萄糖)、氨基酸、无机盐、维生素...通常需加入动物血清等天然成分。一般为液体培养基,也称为培养液。②无菌、无毒的环境。可加入适量抗生素来防止杂菌污染。定期更换培养液,以便清楚代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。③温度(多以36.5±0.5°C为宜)、pH(多为7.2~7.4),渗透压。④气体环境:95%空气和5%CO₂(O₂是细胞代谢所必需的,CO₂主要作用是维持培养液的pH)。
过程:取动物组织(一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官)→用机械的方法或用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理,将组织分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养(两种状态:悬浮生长和贴壁生长,其中贴壁生长的细胞会出现接触抑制的现象,因此需要分瓶)→分瓶(悬浮生长的细胞直接离心法收集,贴壁生长的细胞需重新用胰蛋白酶处理,使之分散为单个细胞后再用离心法收集),进行传代培养。(整个培养过程在CO₂培养箱中进行)传代50次以后,细胞遗传物质可能会发生变化,出现异倍体核型,可连续传代(癌细胞)。
干细胞的培养及应用
胚胎干细胞(简称ES细胞),存在于早期胚胎中,具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞,并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。(体外培养需要分化诱导因子才能进行分化)
成体干细胞:成体组织或器官内的干细胞。一般认为它具有组织特异性,只能分化成特定的细胞或组织,不具有发育成完整个体的能力。造血干细胞是发现最早、研究最多的、应用最成熟的一类成体干细胞。
诱导多能干细胞:通过体外诱导小鼠成纤维细胞(后来发现已分化的T细胞、B细胞也可以),获得了类似胚胎干细胞的一种细胞,简称iPS细胞。