色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（60：40）为流动相；检测波长为254nm.理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于2000.
供试品溶液的制备：取本品20片（小片）或10片（大片），除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，浸泡1小时，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml（剩余的续滤液备用），加在中性氧化铝柱（200～300目，5g，内径1.5cm）上，用甲醇20ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
文献报道的测定穿心莲内酯的含量时，一般以甲醇-水为流动相系统医|学教|育网搜集整理，如：韩光等用HPLC-ELSD法测定穿心莲片中穿心莲内酯的含量：仪器为日本岛津LC-2010高效液相色谱仪、SEDEX蒸发光散射检测器；色谱柱为Aglient Zorbax Extent-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-水（60：40）；流速1.0mL/min；柱温室温。样品用甲醇处理。
测定脱水穿心莲内酯的含量，如：黄平权等HPLC法测定穿心莲片中脱水穿心莲内酯的含量：仪器为日本岛津LC-10A HPLC色谱仪；色谱柱为Shim-pack CLC-ODS （6.0mm×150mm，5μm）；流动相为甲醇-水（70：30）；流速1.0ml/min；检测波长254nm；柱温室温。样品用无水乙醇超声处理。
王群英等用RP-HPLC法测定脱水穿心莲内酯的含量：仪器为岛津LC - 10Apvp高效液相色谱仪；色谱柱为Hypersil-ODS C18 （4.6×50mm，5μm）；流动相为甲醇-水-乙腈溶液（50：40：10）；流速0.8ml/min；检测波长225nm；柱温室温。样品用乙醇超声处理。
