唐氏综合征的遗传学诊断思维导图

祭夏

2022-07-24

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唐氏综合征的遗传学诊断思维导图

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唐氏综合征的遗传学诊断基本流程

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思维导图大纲

临床咨询

1、病史汇总

现病史、月经史、婚育史、既往史、系统回顾、个人史、家族史

处理意见：一般情况、产科情况

2、诊室问诊

无特殊原因流产、年龄较高

母亲年龄越大，卵细胞中染色体在细胞分裂时不分离的概率越大若21号染色体不分离，受精后会形成21三体综合征患儿。

建议唐氏筛查

预约孕18～22周的II级B超，孕16~20周做唐氏筛查。

3、唐氏筛查

病史、产科检查、抽血、检查结果、筛查报告、风险评估

诊断结果：21-三体综合征高危

处理意见：建议于孕17~28周来院行羊膜腔穿刺术，进行羊水染色体检查以明确诊断

羊水穿刺有风险，主要为流产，但风险<0.1%，另外有可能损伤脐带、胎盘或胎儿，造成母体损伤，羊水渗漏，宫内感染，但发生率都很低。

羊水染色体的制备

1、实验原理

1、秋水仙素破坏纺锤体形成，终止细胞分裂，使细胞的分裂停留在中期。

2、低渗作用：低渗溶液是指渗透压和离子强度均低的溶液。可以是水，低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾(0.65mol/L)、氯化钾(0.075mol/L)、稀释的平衡盐溶液或培养基。处理的时间一般为20~40min，处理时的温度为23~37℃。目前常用的是0.075mol/L的KCI作为低渗液，它可以使染色体的轮廓清楚，可染色性增强，染色时间缩短。

3、固定作用：固定是将组织细胞或其成分选择性地固定于某一特定阶段的过程，其目的是在杀死细胞的同时避免所研究成分受到破坏。就细胞遗传学研究而言，固定的目的是在于提高染色体结构的可见性和显示染色体形态的细节，在低渗处理后，应尽早加入固定液进行预固定，固定剂可讯速地穿透细胞，并将细胞瞬间杀死，使正在分裂的细胞立即阻留在各自特定的细胞周期时相上，目前常用的固定剂是1:3的甲醇-冰醋酸混合溶液，即Carnoy固定液

2、羊水细胞的采集及培养

①妇产科医师操作，超声胎儿定位后，用配有21号长腰穿刺针头(带针芯)的20mL注射器，经腹壁行羊膜穿刺抽取羊水(均在无菌条件下进行)，弃去最先抽取的1~2mL或留作AFP测定，以防母体细胞混杂，更换一支注射器取羊水15~20mL分装于两个带盖的无菌离心管中。登记受检者姓名、日期、标记号码等。

②将抽取的羊水以1000r/min离心5min，用吸管弃去上清液，留下0.5~1.0mL上清液及细胞沉淀，用吸管吹打细胞成悬液。

③将细胞悬液1mL接种到2~4mL培养瓶中。每瓶再加入已配好的TC199培养液2mL，塞紧瓶塞，放置于37℃培养箱中培养。

④在37℃下静置培养4~5天。

⑤培养至第5~6天时，在倒置显微镜下观察细胞贴壁及生长情况。如培养顺利可见聚集的或分散的梭形和椭圆形细胞;如培养条件不适宜，只能见少数形态不佳，含粗大颗粒的细胞;如尚未贴壁，加入1mL新鲜预温培养液继续培养2~3天。如细胞生长良好，一般培养1周即需换液，以后每隔2天换液1次。有贴壁细胞时，吸去旧培养液，换加预温的新培养液2mL，置37℃下继续培养。

⑥隔天观察细胞生长情况，当细胞分裂旺盛时，可见多个圆形鼓起的细胞。此时可加入秋水仙素，使其最终浓度为0.05ug/mL，作用3~4小时后这种圆形细胞增多(从此步起不需无菌操作)。即可收获细胞制备染色体标本，一般培养2周左右收获细胞。

⑦如细胞经数次换液后，仅见少数细胞集落，细胞数目不足以收获并制备染色体标本时，则可不加秋水仙素。而需要进行原瓶传代，即用滴管吸去培养液，加入0.25%胰酶Hank's液约0.5mL，静止4~5min。吸去胰酶液，加1~2mL培养液或小牛血清1mL冲洗贴附在培养瓶上的细胞后吸去，再加入培养液2~3mL，用弯头吸管吹打使细胞从瓶壁脱落并均匀分散，在37℃下继续培养。待有足够数量细胞及有丝分裂细胞时，再加秋水仙素以积累中期细胞制备染色体标本。

3、羊水染色体G显带制备流程

①一般在培养的第7天。细胞即生长成“小岛”，如不进行传代培养。第9~15天左右即可制备染色体标本，如经原瓶传代培养细胞生长旺盛，在贴壁细胞层的背景上出现圆形细胞时。可开始制备染色体标本。即可加入10μg/mL秋水仙素0.01mL，使其终浓度为0.05μg/mL，仍置37℃下培养2小时。

②收获细胞:吸出瓶内含有秋水仙素的培养液，移至一离心管中，加0.25%胰酶Hank's液0.5mL于有细胞的培养瓶内，摇动4~5min，吸出移到另一离心管中，再用第一个离心管内培养液洗瓶壁以便冲下残余的细胞，并入第二个离心管中。

③常规制片2~3张，Giemsa常规染色

④取3个50mL立式染色缸，置37℃水浴中。染色缸|加入生理盐水42ml，胰酶8ml，用tris10滴，混匀，PH值7.0-7.2左右，用于细胞遗传消化显带。染色缸II内加大约50mL生理盐水，用于漂洗。染色缸川内加入双蒸水45ml，染色液两管，混匀，用于染片。过程为:取老化的标本片置染色缸|中，胰酶消化显带1分8秒，迅速取出置染色缸II中。轻轻漂洗几次，放染色缸III中染色3-5分钟。取出，用自来水冲洗，置烤箱中将玻片烤干。

4、镜检

先于10倍显微镜下挑选分散好、大小适中的分裂相，然后在油镜下进行计数分析。每一标本计数30个核型，分析5组核型。

5、结果分析

核型为:47,XN，+21