制备衍生物测定其熔点利用甾醇、甾酮类药物与一些试剂反应生成酯、肟、缩氨脲，或利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体，然后测定其熔点进行鉴别。
2.酮肟的生成：如黄体酮与盐酸羟胺作用生成黄体酮双酮肟为例。
3.缩氨基脲的生成：ChP收载苯丙酸诺龙生成其缩氨基脲衍生物。
4.酯的水解：如丙酸睾酮用醇制氢氧化钾水解为例。
水解产物的反应戊酸雌二醇、已酸羟孕酮等药物，先在碱液中水解，经酸化加热分别产生戊酸、己酸特臭，用此法可鉴别这两种药物。
紫外分光光度法丙酸倍氯米松的乙醇溶液(20渭g/ml)在239nm波长处有最大吸收。
红外分光光度法薄层色谱法中国药典收载的炔诺酮、炔雌醚片、丙酸睾酮注射液、倍他米松磷酸钠、醋酸氯地孕酮片、醋酸甲羟孕酮片、醋酸泼尼松片、苯丙酸诺龙注射液、戊酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液、复方己酸孕酮注射液、复方炔诺酮片、复方炔诺酮膜、复方炔诺孕酮片、复方炔诺孕酮滴丸、哈西奈德软膏等甾体激素药物均采用了薄层色谱(标准品对照法)进行鉴别。
高效液相色谱法：
中国药典中醋酸氟轻松软膏、醋酸氟氢可的松软膏、醋酸曲安奈德软膏、丙酸倍氯米松软膏、地塞米松磷酸钠滴眼液、哈西奈德乳膏等的鉴别试验。
特殊杂质的检查聽 聽 聽 1.游离磷酸：地塞米松磷酸钠(中国药典收载)、氢化可的松磷酸钠中检查游离磷酸。
高法系利用酸性溶液中磷酸与钼酸作用生成磷钼酸铵，再经还原形成磷钼酸蓝(钼蓝)，在740nm波长处有最大吸收。
2.甲醇和丙酮：地塞米松磷酸钠中检查甲醇和丙酮。
本品在生产工艺中大量使用甲醇和丙酮，因此药典规定作甲醇与丙酮残留量检查。甲醇限量为3.1ng.聽 聽 聽 聽3.雌酮：炔雌醇中检查雌酮。
本法系根据雌酮的Zimmermann反应来检查的。即在羰基的邻位具有活泼亚甲基的化合物在碱性的氢氧化钾乙醇溶液中，与间二硝基苯反应呈红～蓝色。雌酮是17-酮甾类，因此根据该反应生成紫红色化合物。在此操作中，如果不使用纯度高的间二硝基苯，则呈褐色而难于判定。
4.硒中国药典中规定醋酸地塞米松、醋酸氟轻松要检查"硒".其原理为在氧瓶燃烧破坏后的吸收液中加盐酸羟胺，使Se6+还原为Se4+，在pH2.0卤0.2的条件下与2.3-二氨基萘试液作用，生成4，5-苯丙苯硒二唑，用环己烷提取，于378nm波长处呈最大吸收。考试用书
5.其他甾体①薄层色谱法②高效液相色谱法含量测定1.高效液相色谱法2.紫外分光光度法3.四氮唑比色法四氮唑盐的种类：①2，3，4-三苯基氯化四氮唑(TTC)，也称红四氮唑(RT)，其还原产物为不溶于水的深红色三苯甲zan②蓝四氮唑(BT)，即3，3-二甲氧苯基-双-4，4-(3，5-二苯基)氯化四氮唑，其还原产物为暗蓝色的双甲zan反应原理：皮质激素C17-伪-醇酮基(-CO-CH2OH)具有还原性，在强碱性试液中能将四氮唑盐定量地还原为有色甲zan.生成颜色随所用试剂和条件的不同而定，多为红色或蓝色。
讨论：
①基团影响：C11-酮基的反应速度快于C11-羟基甾体;C21-羟基酯化后较其母体羟基的反应速度慢;当酯化了的基团为三甲基醋酸酯、磷酸酯或琥珀酸酯时，反应更慢。
②溶剂和水分的影响：含水量大时会使呈色速度减慢，但含水量不超过5%时，对结果几无影响，因此可采用95%乙醇。
③碱的种类及加入顺序的影响：在各类碱中，采用氢氧化四甲基铵能得到满意结果，故最为常用。以先加四氮唑盐溶液再加碱液较好。
④空气中氧及光线的影响：反应及其产物对光敏感，故应避光。
⑤温度与时间的影响：一般室温或30℃恒温条件下显色。中国药典多数25℃暗处反应40～45min.4.异烟肼比色法甾体激素C3-酮基及某些其他位置上的酮基都能在酸性条件下与羰基试剂异烟肼缩合形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收。
某些具有两个酮基的甾体激素可形成双腙，如黄体酮、可的松和氢化可的松等。
本法主要用于甾体激素制剂的测定，如倍他米松软膏、哈西奈德软膏、倍他米松磷酸钠及其注射液等的含量测定。
