称取新鲜菠菜叶片0.20 g,剪碎置研钵中，加少量碳酸钙和石英砂，并加入1-2 mL 80%丙酮，研磨成匀浆，再加入4mL 80%丙酮，继续充分研磨，用少许丙酮湿润过的滤纸过滤，再用少量丙酮将滤纸和研钵上的色素冲洗干净，定容至10mL,摇匀。
吸取叶绿素丙酮提取液2 mL至试管中，加80%丙酮2 mL稀释后混匀，倒入比色杯中，以80%丙酮为空白对照，用分光光度计分别在波长645 nm、663 nm和652 nm下测定光密度值。
叶绿素a浓度Ca=（12.7D663-2.59D645）=7.28（mg/L）
叶绿素b浓度Cb=（22.9D645-4.67D663）=2.24（mg/L）
叶绿素总浓度CT=Ca+Cb=9.52（mg/L）
用光密度D652计算：CT=1000×D652/34.5=10.38（mg/L）
叶绿素a含量 =4*（Ca*10mL）/（0.2g*1000）=1.092（mg/g）
叶绿素b含量 =4*（Cb*10mL）/（0.2g*1000）=0.448（mg/g）
叶绿素总含量 =4*（CT*10mL）/（0.2g*1000）=1.904（mg/g）
在稀释叶绿素提取液时需要梯度稀释，防止稀释过度，OD值过小。
叶绿素a，b在蓝光去也有吸收峰，能否用这一吸收峰波长进行叶绿素a，b的定量分析？为什么？
这次试验是在红光区域测的，这是因为叶绿素a，b都在红光区有吸收，而类胡萝卜素也有蓝紫光的吸收。
1、实验步骤：称取5.0g鲜菠菜叶片，剪碎后放人研钵中，加人5 mL 95%乙醇及少许CaCO3粉末和 石英砂研磨成匀浆，再加人15 mL 95%乙醇搅拌均匀，将研磨液用滤纸过滤至25 mL试管中，滤液即为叶绿体色素的粗提液，呈深绿色，内含叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素，以及其他脂溶性物质，保存此液备用。
直接取含有叶绿体色素提取液的试管，分别观察反射光和透射光的颜色，记录并分析观察到的实验现象。
用光照射试管里的液体，在光源同侧看液体是暗红色的，在光源的异侧看液体是绿色的。
观察荧光效应时现象不明显，推测为荧光较弱环境光较强的原因
实验组：取3 mL叶绿体色素提取液，加人1 mL 20% KOH-甲醇溶液，充分摇匀。放置片刻 后，加人3 mL苯，混合后沿试管壁慢慢加人1 mL蒸馏水，得到三层溶液，上层是苯溶液，下层是稀的乙醇溶液，试管底部同时出现白色沉淀，这是乳化现象。如果充分摇匀后再将试管放置在30~40C水浴中，乙醇层溶液很快清澈透明。观察记录苯层和乙醇层的颜色，分析其中溶解的叶绿体色素类型，并说明原因。
对照组:另取3 mL叶绿体色素提取液，直接加入3mL苯和1 mL蒸馏水。记录苯层和乙醇层的颜色，分析其中溶解的叶绿体色素，并说明原因。
实验组由上到下依次为褐黄色（苯溶液），淡绿色（乙醇层）对照组由上到下只
将试管放置在30~40C水浴中，乙醇层溶液很快清澈透明，但是将试管取出一段时间后乙醇层又会变得浑浊，推测为温度影响了相关物质在乙醇中的溶解度。
首先调节分光镜，能在镜简中清晰地观察到光源的连续光谱，然后分别观察叶绿素(皂化反应后的乙醇层溶液)和类胡萝卜素提取液(皂化反应后的苯层溶液)的吸收光谱。将观察到的结果用不同颜色的笔绘图表示。
在皂化作用中的实验组，用叶绿素（乙醇层）对着棱镜。可以看到红色和蓝紫色都有所减弱。
叶绿素对于红光和蓝紫光都有吸收，而类胡萝卜素对蓝紫光吸收比较明显。
1、实验步骤：取5 mL叶绿素提取液至试管中，加入1滴浓盐酸，摇匀，观察溶液颜色的变化，记录现象，分析原因。
另取1支试管，倒人一半上述变色的溶液，加入少许乙酸铜结晶，在酒精灯上徐徐加热，观察溶液颜色变化，记录现象，分析原因。
2、结果：加了浓盐酸后，液体有绿色转为红褐色。加了乙酸铜加热后由红褐色变为翠绿色。
用新鲜叶片提取叶绿素时，为什么一定要加入一定量的碳酸钙？
叶片的液泡里有许多有机酸，会破坏叶绿素，碳酸钙可以通过反应掉酸提高pH，让叶绿素尽可能完好的被提取出来。
对着光源和背着光源观察时，叶绿素提取液的颜色为何不同？
用白光照射叶片。对着光源的时候观察到的是透射光，白光里的红光和蓝紫光被吸收，因此对着光源显示出绿色。
背着光源的时候，看到的是叶片自己射出的荧光。反射光是白光，对观测影响小。荧光是叶片色素吸收蓝光，由最低激发态，发射红光变成基态过程中发射的，显示红色。因此背着光源看到红色。
叶绿素主要吸收红光和蓝紫光。而类胡萝卜素主要吸收和蓝紫光。
1.选择正常生长的植物叶片，保持叶片清洁，使用暗适应叶夹夹住一个叶片， 关闭
2.打开0S-30p+叶绿素荧光测定仪，进入主菜单，选择Fv/Fm -FvF/0 模式。
3.设定调制光光强、饱和光光强和饱和脉冲宽度等参数。
4.分别测量并记录对照及逆境处理植物的F0、Fm、Fv、Fv/Fm Fv/F0等参数。
暗处理的F0明显比光处理的高。光处理的Fm，Fv/Fm，Fv//F0都比暗处理的高。
Fv/Fm：经过充分暗适应的植物叶片PSⅡ最大的量子效率指标。
Fv/F0：间接表示PSⅡ反应中心的能量捕捉效率。
荧光+光化学+热=1，热基本不变，荧光越多，用于光化学的能量越少。
受到暗处理的植株F0显著提高，Fm显著下降。也就是说，如果不光合会浪费掉不少的荧光能量，但是一光合就能更高效的利用光能。
而Fv/F0暗处理后显著降低，则说明其捕捉光的能力下降了。
与正常生长的对照相比，逆境植物测得的F0，Fm，Fv，Fv/Fm，Fv/F0有何差异？
F0更高Fm更低Fv更低Fv/Fm更低Fv/F0更低
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