提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
DNA溶解性
DNA在不同浓度的NaCL溶液中溶解度不同。在0.14moL/L的NaCL溶液中,溶解度最小。
DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
因为酶有专一性,蛋白酶能水解蛋白质,但对DNA没有影响。
DNA比较能耐高温。洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA无影响。
、提取DNA的材料一般用鸡血而不用猪血,因为哺乳动物(猪)成熟的红细胞无细胞核,无DNA。
破碎鸡血细胞时,可以加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可。
为了纯化提取的DNA,需要将滤液进一步处理。
在滤液中加入NaCL,使其浓度为2mol/L,过滤除去不溶的杂质,再加入蒸馏水,使NaCL浓度为0.14mol/L,析出DNA,过滤除去溶液中的杂质。
向溶解了DNA的NaCL溶液中加入体积分数为95%的冷却的酒精溶液,目的是提取含杂质更少的DNA。
PCR
PCR三步骤
在PCR循环之前,常要进行一次预变性,以便增加大分子模板DNA彻底变性的概率。
PCR的结果
特异地复制处于两个引物之间的DNA序列,使这段固定长度的序列呈指数扩增。
凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量较小的蛋白质,移动速度慢,后洗脱出来;相对分子质量较大的蛋白质,移动速度快,先洗脱出来。
电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现各种分子的分离。