灵芝多糖的提取思维导图

孤败

2023-02-21

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中药/药学理论

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中药制剂分析

多糖提取

灵芝多糖

灵芝

多糖

　　近年来，药理学和免疫学的多方研究表明，灵芝多糖芝扶正固本最有效的成分之一，具有广泛的药理活性，排毒、抗放射，提高肝脏、骨髓合成dna、bna的能力，抗肿瘤增强机体免疫等效果。

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思维导图大纲

（一）材料

1.菌种：湖南省食用菌研究所提供的韩国灵芝母种。

2.种子培养基：玉米粉2％大米粉2％

蔗糖2％磷酸二氢钾o.1g

硫酸镁0.05％ ph值自然

3.发酵培养基：麦麸浸出液10％葡萄糖2％

硫酸铵0.2％

磷酸二氢钾0.2％ ph值自然

（二）方法

1.种子培养：

2.发酵培养生产菌丝体。

3.测定干、湿菌丝体。

将发酵液进行离心，然后取其沉淀物，加人60％蔗糖，进行高速（3000转／分）密度梯度离心5分钟，取上层菌丝体，洗净蔗糖再压干，即得湿菌体，然后再将湿菌体于高温下烘干即为干菌体。分别称取其重量。

4.多糖的提取。

（1）菌丝体预处理。取适量的灵芝湿菌体，用乙醇等有机溶剂进行处理，以除去湿菌体中的脂类物质，同时使糖苷酶失去活性，防止多糖的降解。

（2）用热水提取多糖。取上面经预处理的灵芝湿菌体，放人1：20的热水（95℃）中浸提，一次3小时，连续浸提3次，合并3次的水浸提液减压、浓缩至一定体积，再用3倍体积的95％乙醇混合，静置10－12小时，再离心，最后加入75％的乙醇反复洗涤，以沉淀多糖。此沉淀物为粗多糖，其中混杂有蛋白质、色素、低聚糖等小分子杂质，一般要经过纯化。

（3）多糖的纯化，去蛋白质和deae纤维素柱层析。去蛋白质一般采用sevag法：加入0.2倍多糖溶液体积的氯仿和0.04倍体积的正丁醇混合振荡半小时进行分离，直至氯仿与水的界面无沉淀为止，且要重复处理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白质。多糖纯化一般采用硼酸型deae纤维素柱层析法：取脱蛋白后的多糖，分别以0.025mol／l、0.1mol/l的硼砂，0.1mol/l的氢氧化钠溶液进行洗脱，然后用0.2％恿铜硫酸液比色测定吸收度，收集有多糖的洗脱液，再浓缩脱盐即得所需的多糖。

（4）多糖纯度的鉴定。

可用电泳法进行鉴定，如果存在单一带，说明为纯多糖。

5.多糖与多糖中蛋白质含量的测定：

取一定量菌丝体粗多糖，加水煮沸溶解，用sevag方法脱去蛋白考马斯亮兰法测其粗多糖中蛋白质和多糖的含量。测得菌丝体中粗多糖含17.01％、多糖含5.43％、蛋白质含量2.16％。

二、灵芝子实体多糖的提取