无菌区的建立应尽量接近使用时间，以减少暴露和污染的机会。
2.无菌手术衣的应用 无菌手术衣的无菌范围仅限于前身肩平面以下，腰平面以上及袖子。其他部位应视为有菌区。手术人员在穿好手术衣后，前臂不应下垂，应保持在腰平面以上。双手不应接近面部或交叉及放于腋下，应肘部内收，靠医学教|育网搜集整理近身体。由于手术衣在腰平面以下视为有菌的，因而不应接触无菌桌及铺好的手术台。
手术人员倚墙而立或靠坐在未经灭菌的地方，均是违反无菌原则的。也不应来回走动或走出手术间以外。如因手术需要移动，应面向无菌区。与另一手术人员换位时，应先退后一步，转过身，背对背地转到另一位置上。在经过来穿手术衣人员面前时，应互相让开，以免碰撞污染。
3.正确使用无菌包或无菌容器 任何无菌包及容器的边缘均应视为有菌，开包时应将包布的四角翻转并用手握住，防其滑脱污染内容物。取用无菌物时注意不触及边缘。利用包布铺无菌区时，包布的内面是无菌的，包布的外面和边缘是有菌的。若取无菌包内某种无菌物，余下无菌物仍须保持无菌时，可按原包包好，但须在4小时内应用此包内的无菌物，否则须重新灭菌。
无菌容器为盛无菌敷料、器械或药液之用。打开无菌容器时，盖子应朝上，取出无菌物后即盖好。以容器浸泡消毒用物时，须写上浸泡时间，中途投入其他器械，应重新计算消毒时间。
无菌溶液瓶一经打开，液体应一次用完，不应保留。倒液时应冲一下瓶口，冲洗瓶口的药液应弃去，以保证无菌及防瓶口杂质和玻璃碎屑。
4.无菌桌的无菌范围 无菌桌仅桌缘平面以上是无菌，桌缘平面以下，不能长时间保持无菌完整，应视为有菌。手术护士、巡回护士都不应接触无菌桌缘平面以下的桌布，以建立一个安全地带。
凡坠落于手术台边或无菌桌缘平面以下的物品应视为有菌。已坠落下去的皮管、电线、缝线不应再向上提拉或再用。无菌布单被水或血浸湿时，应加盖或更换新的无菌单。
5.接触无菌区时，必须经过手臂灭菌、穿无菌衣及戴无菌手套。巡回护士取用无菌物品要用无菌持物钳夹取，并应与无菌物、无菌区保持一定的距离（约30cm），避免衣袖、衣服接触无菌物及跨越无菌区，倾倒溶液时只许瓶口进入无菌区的边缘。
6.减少空气污染、保持空气净化效果。手术室门窗应关闭，人员进出应走侧门，尽量减少医学教|育网搜集整理在手术间内走动，避免引起阵风。手术进行中应保持肃静，避免不必要的谈话。咳嗽、打喷嚏时应将头转离无菌区，避免飞沫污染。为防手术人员滴汗，可于额部加一无茵汗带。请他人擦汗时，头应转向一侧，不使纱布纤维落入无菌区。无菌容器打开后，应及时盖好，减少暴露。
7.皮肤虽经消毒，只能达到相对无菌 病人的皮肤和工作人员手臂经过消毒以后只能达到相对灭菌，残存在毛孔内的细菌对开放的切口有一定的威胁，故应注意预防污染。
在穿无菌手术衣及戴无菌手套时，手不应接触手术衣和手套的外面。戴好手套的手也不可直接接触病人皮肤。凡与皮肤接触的刀片和器械不应再用。手术进行中，如手套被撕破或被缝针、锐利器械刺破，应立即更换。针和器械也不可再用。
在进行皮肤切口前，应用无菌纱布垫遮住切口两旁，或用无菌聚乙烯薄膜盖于手术野皮肤上，经薄膜切开皮肤，以保护切口不被污染。在延长切口或进行缝合前应再用酒精消毒。
8.沾染手术的隔离技术 进行胃肠道、呼吸道、宫颈等沾染手术时，在切开空腔前应用纱垫保护周围组织，并随时吸除外流的内容物。被污染的器械和其他物品应放在污染盘内，实行隔离。污染的缝针和针持应在等渗盐水中涮洗。全部沾染步骤完成后，手术人员应用无菌水冲洗或更换手套，以尽量减少细菌的污染。
9.连台手术前台手术结束，手术人员应更换无菌手术衣及消毒手臂戴无菌手套，手术间地面及用物应用消毒液擦拭，并用紫外线照射20分钟。
