淋巴细胞的分离|检测技术思维导图

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2023-02-16

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临床医学理论

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淋巴细胞分离

淋巴细胞检测技术

淋巴细胞

淋巴细胞的分离|检测技术： 1.免疫荧光法常用间接法检查淋巴细胞表面标志，鉴定细胞的群、亚群。如CD3+、CD4+、CD8+、mIg等。 2.流式细胞术是借助流式细胞仪对免疫细胞进行快速准确鉴定和分类的技术。 3.磁珠分离法磁珠分离法是利用免疫磁珠进行分离细胞的方法。免疫磁珠（IMB）是特异性抗体与磁性微粒的交联物。

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思维导图大纲

1.免疫荧光法

常用间接法检查淋巴细胞表面标志，鉴定细胞的群、亚群。如CD3+、CD4+、CD8+、mIg等。

2.流式细胞术

是借助流式细胞仪对免疫细胞进行快速准确鉴定和分类的技术。

3.磁珠分离法

磁珠分离法是利用免疫磁珠进行分离细胞的方法。免疫磁珠（IMB）是特异性抗体与磁性微粒的交联物。IMB可通过磁珠上的特异性抗体识别并结合表达相应膜抗原的细胞。应用磁场，可分离结合IMB的细胞。如采用抗CD3特异性抗体IMB可分离T淋巴细胞。

4.T细胞的功能测定技术

（1）T淋巴细胞转化试验：在体外培养的条件下，人T淋巴细胞受特异性抗原（如结核菌素）或非特异性有丝分裂原如植物血凝素（PHA）的刺激后可发生增生，转化为淋巴母细胞。以3H-胸腺嘧啶参人试验可测定淋巴细胞发生转化的程度。细胞免疫功能低下的人，T淋巴细胞转化率降低。刀豆蛋白A（ConA）是小鼠T细胞的非特异性有丝分裂原。

（2）混合淋巴细胞培养：器官移植前应取受体与供体的淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养试验以挑选合适的供体。混合淋巴细胞培养分双向法和单向法。

双向法：将两个人体的淋巴细胞混合在一起培养，若二者的HLA分子不同，两个来源的淋巴细胞都会受到刺激而发生转化。根据转化的程度可判定两个个体淋巴细胞HLA分子的相异的程度。单卵双生子间的淋巴细胞混合培养后不发生转化。

单向法：将一个个体的淋巴细胞用丝裂霉素或放射处理使之失去自身的转化能力，但保留着抗原性。用这种淋巴细胞的未经处理的另一个个体的淋巴细胞混合培养。根据未经处理的淋巴细胞的转化程度来判定两个个体淋巴细胞HLA分子的相差的程度。混合淋巴细胞培养实验中，T淋巴细胞和B淋巴细胞均可发生转化。

（3）迟发超敏反应皮试：将已知量的抗原（如结核菌纯化蛋白衍生物）注射入前臂皮内，24～48小时后测定硬结大小，硬结直径大于10mm即被视为阳性医|学教育网搜集整理。皮试阴性的人，可能有细胞免疫功能低下也可能未接触过相应的抗原。

（4）细胞介导的细胞毒试验：用效应性CTL和51Cr标记的靶细胞相互作用。被杀伤的靶细胞可释放51Cro测定靶细胞释放的51Cr产生的放射性，就可判定效应细胞应性CTL的细胞毒活性。用类似的方法也可测定NK细胞的细胞毒活性。

5.B淋巴细胞功能的检测

（1）B淋巴细胞转化试验：将人淋巴细胞和不溶性的金黄葡萄球菌（B淋巴细胞分裂原）一起培养，以3H-胸腺嘧啶参入试验可测定发生B淋巴细胞发生转化的程度。细菌脂多糖是小鼠的B细胞分裂原。

（2）抗体生成细胞的测定：常用溶血空斑试验。在此实验中，抗体生成细胞分泌的Ig与绵羊红细胞（SRBC）表面的抗原结合，在补体参与下出现溶血反应。方法是将吸附有已知抗原的SRBC、待检的B细胞、补体及适量琼脂糖液混合，倾注平皿，温育1～3小时后，肉眼可见分散的溶血空斑，每一空斑中央含一个抗体形成细胞，空斑数目即为抗体形成细胞数。

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