ADA检测方法的开发和验证思维导图模板大纲
阳性对照抗体
检测模式为桥连法时（如对于单抗类药物），阳
性对照抗体理论上无种属限制和免疫球蛋白亚型限制，但应
注意IgG4亚型不适用。
浓度选择
常规的抗药抗体检测，监测系统适用性可只用高、低浓度质控样品
高浓度阳性对照选择没
有钩状效应的信号曲线高端对应的浓度，或者模拟样本中预
期最高浓度水平
采用统计的方式确定低浓度阳性对照样品的度，
一般以1%的分析批拒绝率来进行计算
对于非临床研究，可
根据灵敏度确定试验的准曲线，采用1.5~2倍阴性对照或
1.5~2倍筛选临界值仪器响应值或其转换值对应的浓度作为
低浓度阳性对照样品
阴性对照抗体
来自至少10例代表性未给药个体基质的混合物，可能模拟待测样本的基质特点，并采用与待测样本相同的预处理方式
应对临界值、灵敏度和选择性等重要方法学参数进行确认，以可能含有的预存抗体、可
发生结合的蛋白、可溶性受体等因素进行评估
阴性对照样本的信号值应当低于但接近于筛选临界值，能够代表临界值确定试验中个体样本的信号波动情况
临界值
筛选临界值
筛选临界值的确定应基于多个空白个体基质响应值
非临床研究应选择不少于 15 个，临床研究应选
择不少于 50 个空白个体基质
临床前研究中至少对分析人
员、日期两个实验变量进行考察，临床研究中，根据实际情
况可能还需要对更多变量，例如仪器、固相载体等进行考察，
分析时各样本均设置复孔。
非临床研究中，筛选临界值应基于至少 2 名分析员在至
少 3 天进行的 3 个分析批的响应值（或基于阴性对照校正后
的数值）进行统计分析获得
临床研究中，应考察至少 2 名分析员在至少 3 天进行的 6 个分析批
采用空白个体95%百分位数的单侧 90%置信区间下
限得到
确证临界值
建议确证临
界值确定试验与筛选临界值确定验在同一个分析批或分
析板上进行。对空白基质数量、考察变量和复孔检测的要求
与筛选临界值确定试验相同。
灵敏度
方法灵敏度是通过阳性对照抗体建立的，可能无法完
全代表特定受试者体内的抗药抗体应答情况。
考察在预期药物浓度下的灵敏度，可以确认残留药物对灵敏度可能的影响
方法灵敏度
确认方法1：通常在混合空白生物基质中按照不高于 2~3 倍的梯度稀释阳性对照样品（应采用经亲和层析纯化后的多抗或单抗）至系列（至少 5个）已知浓度，然后确定或计算灵敏度，
确认方法2：在至少满足一个浓度的
响应值于筛选/确证临界值的情况下，高于筛选/确证临界
值的最低浓度即为方法灵敏度
确认方法3：采用横跨筛选
/确证临界值的两个点进行截距法计算
确认方法4：对各浓度的响应值和浓度进行曲线拟合，根据筛选/确证临界值计算的阳性对照抗体浓度即为方法灵敏度。
药物耐受水平
需要结合待测样本中的药物浓度进行考察，使用混合空白基质稀释受试药物至合适系列浓度，
用该系列稀释样本与不同浓度阳性对照抗体混合后进行检
测，应至少包含低浓度阳性对照抗体或者 100ng/mL 浓度的
阳 性 对 照 抗 体 ， 非 临 床 研 究 中 可 适 度 考 察 更 高 浓 度
（250~500ng/mL）的阳性对照抗体
响应值高于筛选临界值
所对应的最高受试药物浓度即为该浓度阳性对照抗体能够
耐受的最大药物浓度，也可以使用横跨筛选临界值的两个点
进行截距法计算，得到该浓度阳性对照抗体能够耐受的最大
药物浓度。
精密度
批内精密度
来源于含至少 6 套独立
配制的系统适用性对照样品的分析批数据，通过系统适用性
样品（阴性对照、低浓度阳性对照、中浓度阳性对照、高浓
度阳性对照以及确证试验的免疫耗竭对照）的变异系数
（%CV）来呈现
滴度试验
批内精密度
通过含有至少 3 套独立配制的滴度阳性对照样品进行评估
批间精密度
通过至少 3 个分析批至少 9 套滴度阳性对照样品进行评估
特异性
考察指标包括
但不限于血清中的因子（如类风湿因子）、脂质、血红蛋白、
预存抗体和/或合并用药等对方法的干扰作用
采用添加或
未添加药物或其相关物质的阴性对照样品和低浓度阳性对
照样品进行特异性考察
选择性
方法学验证时，筛选试验、确证试验中采用至少 10 个空
白个体基质在空白水平、低浓度阳性对照水平考察选择性，
确保至少80%个体的选择性考察结果符合方法学验证的预期
接受标准。有些情况下，需考察溶血或高脂对样本检测的影
响。
钩状效应
通
过在混合基质中加入阳性对照抗体进行一系列稀释的方法
来进行评估
其他验证内容
重现性
研究期间样本由两个或多个独立实验室进行检
测，重现性是重要的考量因素，应保证不同实验室产生的数
据具有可比性
应在实验室之间建立可比较的方法性能，包
括临界值，灵敏度，药物耐受性，精密度等
相同的抗凝剂、采样体积、相似的制备方法和相同的储存条件等思维导图模板大纲
将样本定义为阳性或阴性结果的响应水平思维导图模板大纲
以百分比抑制率表示思维导图模板大纲
通常将某一特定浓度的受试药物加入空白个体基质，通过加入药的空白个体基质复孔信号值与未加药物空白个体基质复孔信号值计算信号抑制率，在剔除离群值后，
可选择信号抑制率的99%百分位数的80%~90%单侧置信区
间的下限（即允许1%假阳性）作为确证临界值。
是指阳性对照样品检测结果持续为阳性或读数等同于该检测方法临界值的最低浓度。思维导图模板大纲
阳性对照抗体为高亲和力抗体，灵敏度可能被高估思维导图模板大纲
建议以阳性对照抗体的加样浓度乘以最小稀释倍数后进行灵敏度的报告。思维导图模板大纲
对于非临床研究，方法灵敏度一般需达
到 250~500 ng/mL
对于临床研究，在筛选和确证试验中，IgG 和 IgM 型抗药抗体的检测灵敏度一般应达到 100 ng/mL，IgE 型抗药抗体的检测灵敏度需达到几百 pg/mL 或几
ng/mL 级别
游离受试药物对方法学的干扰思维导图模板大纲
药物耐受水平数据仅代表某特定浓度的
阳性对照抗体样品对药物的耐受特性
方法开发时，需对可能影响药物耐受性的选择性、靶
点的性质及阳性对照类型进行考察。思维导图模板大纲
不同的分析时间、分析批（板）、分析仪器及分析员之间分析结果的偏离程度思维导图模板大纲
某种方法对于某一目标分析物的专属检测能力思维导图模板大纲
指分析方法能够在样本中存在其他成分的情况下检出特异性针对该药物的抗药抗体的能力思维导图模板大纲
由于存在高浓度的特异性的被分析物或者体，出现信号值减少，从而可能导致假阴性信号。思维导图模板大纲
